如何用高效液相色譜（HPLC）進行蛋白質(zhì)的純度檢測及含量測定?

首先,蛋白質(zhì)的測定一般用凝膠滲透色譜
分子量測定：用HPLC測定幾個分子量已知的蛋白質(zhì),繪制分子量與調(diào)整保留時間相對應的標準曲線,然后再在相同條件下測未知蛋白的保留時間,用標準曲線對照即可的未知蛋白的分子量；
含量測定：用蛋白質(zhì)標樣配制一系列不同濃度的蛋白質(zhì)溶液,繪制蛋白質(zhì)濃度與峰高/峰面積相關(guān)的標準曲線,再在相同條件下測位置樣品的峰高/峰面積,即可得未知樣品的濃度；
純度測定：保證待測樣品中所有組份均出峰的情況下,用目標蛋白的峰面積/峰高除以所有峰峰面積/峰高的總和即可的目標蛋白的純度.

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